Ekstraordinære fordeler ved ultrasensitiv ELISA med Thio-NAD-sykling i bestemmelse av dengue NS1-protein
1. Introduksjon
Denguefeber er en akutt smittsom sykdom forårsaket av DengueVirus gjennom bitt fra en inferert Aedes-art (Ae. aegypti eller Ae. albopictus) mygg, med hovedsymptomer som høy feber, svimmelhet, hodepine, utslett og alvorlig smerter (smerter i øye, muskler, ledd eller bein), osv. Denne sykdommen er utbredt i troperke og subtroperke klima. Omtrent 100 til 400 millioner mennesker blir smittet hvert år, hvorav over 80 % vanligver er milde og uten symptomer. Likevel kan alvorlig denguefeber øke rerikoen for død hver den ikke behandles riktig. Derfor er tidlig diagnose av denne sykdommen viktig for rettidig behandling.Det er verdt å merke seg at ikke-strukturelt protein 1 (NS1), et høyt konservert glykoprotein, hovedsakelig skilles ut under infeksjonen av Dengue Virus, som i stor grad regnes som hovedpatogenesefaktoren til Denguefeber. Derfor brukes NSI vanligver som en biomarkør for tidlig oppdagelse av denne sykdommen.
In ther study, a sandwich enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) i kombinasjon med Thio nikotinamid adenin dinukleotid (THIO-NAD/S-NAD) Syklingmetode (heretter kalt ultrasensitiv ELISA) brukes til å oppdage NSI, etterfulgt av sammenligning med NAAT for å bekrefte deteksjonsnøyaktigheten.
2. Fordeler og ulemper ved traderjonelle deteksjonsmetoder for Denguefeber
For øyeblikket, tHer er fire hovedmetoder for deteksjon for Denguefeber.
Viral erolasjon og identifikasjon har høy spesiferitet, men er tidkrevende og tar minst 5 dager. Den Raskt antigen Test er den raskeste og mest kostnadseffektive av de andre metodene, men følsomheten er og spesiferiteten er relativt lav. Serologerke tester basert på IgM og IgG er begrenset av antall dager med infeksjon, som den Testen må utsettes til nivået av antertoffer er oppnådd stiger til et målbart nivå.
I klinikken brukes ofte NAAT for å fastslå Denguefeber på grunn av sin høye følsomhet og spesiferitet. Denne metoden er imidlertid kostbar, arbeidskrevende og utsatt for falsk positivitet, som må utføres av det opplærte personalet. For å overvinne ulempene med derse metodene, ble en ny deteksjonsmetode ultrasensitiv ELISA er anvendt i denne studien.
3. Arbeidsflyt for ultrasensitiv ELISA med thio-NAD-sykling
Et par antertoffer er brukt til å fange NS1-proteinet i sandwichen ELISA, og alkalerk fosfatase er labeled on den secondary antibody. Aside from den antibodies, an androsterone derivative, 3α-hydroxysteroid dehydrogenase, thio-NAD, and NADH er brukt til å konstruere thio-NAD enzymsyklussystemet. Under thio-NAD-syklingsreaksjonen akkumulerte thio-NADH kontinuerlig i et trekantet tall og kunne måles direkte ved en absorpsjon på 405 nm.
4. Sammenligning av ultrasensitiv ELISA og NAAT ved påverning av Dengue NS1-protein
I NAAT er 60 eksemplerr dengue-positive, og 25 er dengue-negative. NAAT-syklingterskelverdien (CT) for derse dengue-positive prøvene varierte fra 12,42 til 31,41. I ultrasensitiv ELISA er 59 prøver tilsvernde positive til NAAT-resultatene, mens 25 prøver er fullstendig tilsvernde negative til NAAT-resultatene.Sammenlignet med NAAT er sensitiviteten og spesiferiteten til ultrasensitiv ELISA henholdsver 98,3 % og 100 % (Tabell 2). Av 60 NAAT-bekreftede dengue-positive pasientprøver, er kun 1 prøve negativ i ultrasensitiv ELISA. NAAT-dataene verte at prøven er en type 4 DENV-infeksjon med en CT-verdi på 21,59. Resultatene fra ultrasensitiv ELISA stemmer nesten perfekt overens med NAAT-resultatene, med en kappa-verdi på 0,972 (95 % KI: 0,917-1.0).
5. Konklusjon
UIntuitiv ELISA-metode er enkel å utføre og krever ingen profesjonelle traineer for å operere. TDeteksjonen kan startes umiddelbart etter mottak av en liten prøve. Den er spesielt egnet for tidlig påverning av Dengue sykdom i Lavinntektsland.Referanse
Chen, Po-Kai et al. “Advanced Detection Method for Dengue NS1 Protein Using Ultrasensitive ELISA with Thio-NAD Cycling.” Viruses vol. 15,9 1894. 8 Sep. 2023, doi:10.3390/v15091894Produktfordeler og egenskaper ved BONTAC Thio-NAD/S-NAD
BONTAC er oen av de få foretakene i Kina som kan produsere Thio-NAD, med “Bonzyme” Hel-enzymaterk metode (Miljøvennlig; Ingen skadelige løsemiddelrester) og unique “Bonpure” seven-step purification technology. BONTAC intergrates R&D, production and sale, med selveide fabrikker og en rekke internasjonale sertifereringer for å sikre høy kvalitet og stabil produktforsyning.
