НМНХ: 1. "Bonzyme" Цельноферментативный метод, экологически чистый, не содержащий вредных остатков растворителей порошок для производства. 2. Bontac является самым первым производителем в мире, производящим порошок NMNH на уровне высокой чистоты, стабильности. 3. Эксклюзивная семиступенчатая технология очистки "Bonpure", высокая чистота (до 99%) и стабильность производства порошка NMNH 4. Собственные заводы и полученный ряд международных сертификатов для обеспечения высокого качества и стабильных поставок продукции из порошка NMNH 5. Предоставление универсальных услуг по настройке продуктовых решений
НАДН: 1. Цельноферментативный метод Bonzyme, экологически чистый, без вредных остатков растворителей 2. Эксклюзивная семиступенчатая технология очистки Bonpure, чистота выше 98% 3. Специальная запатентованная форма кристаллов процесса, повышенная стабильность 4. Получен ряд международных сертификатов для обеспечения высокого качества 5. 8 отечественных и зарубежных патентов НАДХ, лидирующих в отрасли 6. Предоставление универсальных услуг по настройке продуктовых решений
НАД: 1. "Bonzyme" Цельноферментативный метод, экологически чистый, без вредных остатков растворителей 2. Стабильный поставщик 1000+ предприятий по всему миру 3. Уникальная семиступенчатая технология очистки "Bonpure", более высокое содержание продукта и более высокая конверсия 4. Технология сублимационной сушки для обеспечения стабильного качества продукции 5. Уникальная кристаллическая технология, более высокая растворимость продукта 6. Собственные заводы и получение ряда международных сертификатов для обеспечения высокого качества и стабильных поставок продукции
НМН: 1. "Bonzyme"Цельноферментативный метод, экологически чистый, без вредных остатков растворителей 2. Эксклюзивная семиступенчатая технология очистки "Bonpure", высокая чистота (до 99,9%) и стабильность 3. Передовые промышленные технологии: 15 отечественных и международных патентов NMN 4. Собственные заводы и получение ряда международных сертификатов для обеспечения высокого качества и стабильных поставок продукции 5. Многочисленные исследования in vivo показывают, что Bontac NMN безопасен и эффективен 6. Предоставление универсальных услуг по настройке продуктовых решений 7. NMN поставщик сырья для знаменитой команды Дэвида Синклера из Гарвардского университета
Bontac Bio-Engineering (Shenzhen) Co., Ltd. (далее именуемая BONTAC) является высокотехнологичным предприятием, основанным в июле 2012 года. BONTAC объединяет исследования и разработки, производство и продажи, с технологией ферментного катализа в качестве ядра и коферментами и натуральными продуктами в качестве основных продуктов. В BONTAC представлены шесть основных серий продуктов, включая коэнзимы, натуральные продукты, заменители сахара, косметику, биологически активные добавки и медицинские промежуточные продукты.
Как лидер мировогоНМНBONTAC обладает первой в Китае технологией катализа цельных ферментов. Наши коэнзимные продукты широко используются в здравоохранении, медицине и красоте, зеленом сельском хозяйстве, биомедицине и других областях. BONTAC придерживается независимых инноваций, имея более170 патентов на изобретения. В отличие от традиционной индустрии химического синтеза и ферментации, BONTAC обладает преимуществами экологически чистой технологии биосинтеза с низким содержанием углерода и высокой добавленной стоимостью. Более того, BONTAC создала первый исследовательский центр технологий коэнзимной инженерии на провинциальном уровне в Китае, который также является единственным в провинции Гуандун.
В будущем BONTAC сосредоточится на своих преимуществах зеленой, низкоуглеродной технологии биосинтеза с высокой добавленной стоимостью, а также на построении экологических отношений с научными кругами, а также с партнерами по разведке и добыче, постоянно лидируя в индустрии синтетической биологии и создавая лучшую жизнь для людей.
Порошок NMN обычно производится путем химического или ферментативного синтеза или ферментационного биосинтеза. У всех трех методов есть плюсы и минусы.
Химический синтез является дорогостоящим и трудоемким процессом, а все используемые ингредиенты относятся к категории «ненатуральных», т.е. не из биологических систем. Тем не менее, есть некоторые преимущества с точки зрения производителя. Выход хорошо подходит для массового производства порошка NMN, и все эти ненатуральные сырьевые ингредиенты можно тщательно контролировать. Но есть и ряд недостатков. Некоторые из растворителей, используемых в производственном процессе, очень вредны с экологической точки зрения, а примеси и побочные продукты может быть трудно удалить из готового продукта, что серьезно вредно для потребителя.
Ферментативное производство порошка NMN, с другой стороны, считается «методом зеленого приготовления». Как и химический способ, он дорогой, но предлагает более высокий выход и впечатляюще высокую чистоту. Готовый NMN отвечает всем требованиям – стабильный, легко усваивается, легкий, имеет низкую плотность и низкомолекулярную структуру.
Ферментация также была исследована как метод производства NMN, но выход, хотя и высокого качества, довольно ужасен, поэтому многие компании, производящие добавки, вполне разумно рассматривают другие, более эффективные процессы.
Согласно недавнему промышленному отчету, только несколько продуктов от мировых производителей NMN приблизились к заявлению на этикетке и не содержат достаточного количества NMN. Почти продукты показали себя лучше, имея не менее 88% заявленной марки вплоть до небольших излишеств. Единственный продукт в дозе 250 мг был идентифицирован как BRL. В целом, ChromaDex заявила, что 64% протестированных продуктов содержали менее 1% от заявленного количества активного ингредиента. Что должно заставить потребителей задуматься. Хотя это ограниченный снимок обширного ландшафта готовой продукции NMN. Это дает представление о высокой вариативности качества доступной продукции. Большинство продуктов, которые можно приобрести через Интернет, содержат настолько малое количество NMN, что клинические преимущества от этой дозы не будут достигнуты. Еще одна проблема, связанная с этими фальсифицированными продуктами, заключается в том, что фактическое содержимое неизвестно и может представлять риск для пользователя, говорится в заявлении компании.
1. «Bonzyme» Цельноферментативный метод, экологически чистый, без вредных остатков растворителей для производства порошка
2. Эксклюзивная семиступенчатая технология очистки «Bonpure», высокая чистота (до 99,9%) и стабильность производства порошка NMN
3. Ведущая промышленная технология: 15 отечественных и международных патентов NMN
4. Собственные заводы и получили ряд международных сертификатов для обеспечения высокого качества и стабильных поставок продукции из порошка NMN
5. Многочисленные исследования in vivo показывают, что порошок Bontac NMN безопасен и эффективен
6. Предоставление универсальных услуг по настройке продуктового решения
7. NMN поставщик сырья для знаменитой команды Дэвида Синклера из Гарвардского университета.
1. Процесс производства сырья
Биоферментный катализ является популярным методом производства в промышленности. Он имеет высокий порог и несколько ключевых каталитических ферментов стоят дорого, составляя около 80% от общей стоимости производственного процесса, но это также самый безопасный и эффективный метод производства. При производстве NMN методом биоферментного катализа использование пищевого сырья является важной частью процесса для обеспечения безопасности продукта и соблюдения стандартов.
2. Высокий стандарт производственных условий
Под производственными условиями понимается норма трудоемкости, необходимая для комплектации качественной продукции агрегата при определенной организации производства и условиях технологии производства. Существуют сертификаты, выданные регулирующими органами, такие как cGMP в США, TGA в Австралии, GMP в Японии и т.д.
3. Высокий стандарт тестирования продукта.
Для тестирования продукции требуются надежные методы испытаний и реагенты, которые используются на протяжении всего производственного процесса. Они представляют собой стандарты проверки не только для конечного продукта, но и для промежуточных этапов контроля, включая тестирование активных ингредиентов, тестирование тяжелых металлов, таких как свинец, мышьяк и ртуть, а также тестирование патогенных бактерий, микроорганизмов и побочных продуктов переработки.
Для продуктов NMN обычно используется метод определения содержания активных ингредиентов с помощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ), которая является эффективной, точной и точной. У разных производителей стандарты тестирования реагентов отличаются. Строгие производители будут закупать реактивы высокой чистоты, аналитически чистые у сторонних компаний, отвечающих стандартам, в качестве средств контроля.
4. Оценка безопасности
Для относительно нового сырья, такого как NMN, потребителям недостаточно судить о безопасности продукта только со стороны продавца. На этом этапе особенно важен независимый авторитетный отчет об оценке.
В настоящее время существует два общих отчета об оценке безопасности, один из которых является отчетом о токсикологической оценке, а другой — отчетом об оценке безопасности. В Китае отчеты о токсикологической оценке обычно составляют большинство. Однако пока немногие компании НМН могут выдавать такие отчеты
5. Хранение и упаковка
НМН обычно хранятся в герметичных контейнерах до 12 месяцев. Если его можно хранить в течение 24 месяцев с незначительными изменениями чистоты, стабильность NMN очень надежна. В настоящее время более распространенными упаковочными материалами являются ПЭТ или Хоуп, которые являются фармацевтическими упаковочными материалами. Они нетоксичны, не имеют запаха, легкие, портативны и эффективно изолируют воздух и влагу.
Безопасность порошка NMN не может быть оценена, поскольку необходимые клинические и токсикологические исследования еще не завершены для установления рекомендуемых безопасных уровней для длительного применения. Тем не менее, их безопасность и эффективность неясны и ненадежны, поскольку большинство из них не были подкреплены строгими научными доклиническими и клиническими испытаниями. Эта проблема возникла из-за того, что производители не решаются платить за исследования и клинические испытания из-за потенциального снижения прибыли, а также из-за отсутствия уполномоченного органа для регулирования продукции NMN, поскольку она часто продается как функциональный пищевой продукт, а не как строго регулируемый терапевтический препарат. Поэтому группы по защите прав потребителей требуют более строгого процесса утверждения, требуя от регулирующих органов установить стандарты и ограничения для маркетинга антивозрастных продуктов для здоровья, учитывая безопасность, здоровье и благополучие потребителей. NMN не следует рассматривать как панацею для пожилых людей, потому что повышение уровня NAD, когда в этом нет необходимости, может привести к некоторым пагубным эффектам. Таким образом, доза и частота приема добавок НМН должны быть тщательно назначены в зависимости от типа возрастного дефицита и всех других состояний здоровья людей. Другие предшественники NAD были изучены для выявления эффективности при различных возрастных дефицитах, и они используются при определенных дефицитах только после того, как их эффективность и безопасность в использовании доказаны. Следовательно, тот же принцип должен быть применен и к NMN
Во-первых, осмотрите завод. После некоторого скрининга компания NMN пришла к выводу, что непосредственно обращенные потребители уделяют больше внимания построению бренда. Поэтому для хорошего бренда качество – это самое главное, и первое, что нужно контролировать – это инспектировать фабрику. Компания Bontac фактически производит порошок NMN высокого качества с помощью катеров SGS. Во-вторых, проверяется чистота. Чистота является одним из важнейших параметров порошка NMN. Если высокая чистота NMN не может быть гарантирована, остальные вещества, скорее всего, превысят соответствующие стандарты. Как свидетельствуют прилагаемые сертификаты, порошок NMN, производимый компанией Bontac, достигает чистоты 99,9%. Наконец, для доказательства этого необходим профессиональный тестовый спектр. К распространенным методам определения структуры органического соединения относятся спектроскопия ядерного магнитного резонанса (ЯМР) и масс-спектрометрия высокого разрешения (HRMS). Обычно с помощью анализа этих двух спектров можно предварительно определить структуру соединения.
1. Введение Нарушенный метаболизм никотинамидадениндинуклеотида (НАД+) все чаще рассматривается как один из факторов риска прогрессирующих сердечно-сосудистых заболеваний. Имеются существенные доказательства того, что восстановление запаса НАД+ и энергетического метаболизма может быть эффективным в облегчении симптомов у пациентов с сердечной недостаточностью (СН), одним из типичных сердечно-сосудистых заболеваний после инфаркта миокарда (ИМ). 2. О ВЧ СН имеет доминирующие клинические признаки нарушения наполнения желудочков или выброса, сопутствующие аномалиям структуры/функции сердца. Этим расстройством страдают около 38 миллионов пациентов во всем мире, и число пациентов с СН растет с возрастом, представляя большую угрозу для жизни пациентов и принося огромную экономическую нагрузку на семью пациента и общество. С точки зрения медикаментозной терапии СН, «золотой треугольник» бета-блокаторов, ИАПФ/БРА и антагонистов альдостероновых рецепторов долгое время был предпочтительным вариантом. Несмотря на значительное улучшение выживаемости пациентов, 5-летняя смертность остается на уровне 50%. Следовательно, большое значение имеет поиск нового способа с высокой эффективностью и безопасностью. Добавки NAD могут быть эффективным выбором для смягчения СН. 3. Протокол исследования Для дальнейшей проверки эффективности НАД+ построены модели СН, индуцированные ИМ, у самцов крыс Спрэг-Доули и биглей. В последующем левую переднюю нисходящую артерию животных с СН, индуцированным ИМ, перевязывают в течение 1 недели, после чего проводят 4-недельное лечение с низкой/средней/высокой дозой НАД+ и положительным контрольным препаратом LCZ696, блокатором ангиотензиновых рецепторов-ингибитором неприлизина с кардиопротекторным эффектом после ИМ. 4. Эффективность НАД на крысах и биглях с СН, индуцированной ИМ НАД+ демонстрирует эффективность, эквивалентную LCZ696 в лечении СН, индуцированной инфарктами миокарда, или даже лучше, чем LCZ696 в средних и высоких дозах. В моделях HF крыс/биглей индекс массы сердца, функция сердца и фиброз миокарда в маргинальной зоне инфаркта дозозависимо улучшаются после введения NAD или LCZ696, что проявляется в уменьшении конечного систолического объема, конечного систолического размера, креатинкиназы и лактовой дегидрогеназы, а также в увеличении фракций выброса, фракционного укорочения, сердечного выброса и ударного объема. Кроме того, снижение артериального давления левого желудочка у животных модели СН улучшается после введения NAD или LCZ696. 5. Заключение В моделях СН, индуцированных ИМ у крыс и биглей, НАД+ заметно облегчает гипертрофию миокарда и сердечную функцию, подавляет фиброз миокарда и уменьшает инфаркт миокарда, закладывая теоретическую основу для клинического применения терапии энергетического метаболизма с НАД+. Ссылка Пэй З., Ян С., Го И., Донг М., Ван Ф. Роль НАД+ в развитии сердечной недостаточности, вызванной ишемией миокарда, у крыс и биглей породы Спрэг-Доули. Курр Фарм Биотехнол. Опубликовано онлайн 13 февраля 2024 года. DOI:10.2174/0113892010275059240103054554 БОНТАК НАД С 2012 года BONTAC занимается исследованиями и разработками, производством и продажей сырья для коэнзимов и натуральных продуктов, имея собственные заводы, более 170 мировых патентов, а также сильную команду по исследованиям и разработкам, состоящую из докторов и магистров. BONTAC обладает богатым опытом исследований и разработок и передовыми технологиями в области биосинтеза NAD и его предшественников (например, BONTAC). NMN и NR), с различными формами, которые должны быть выбраны (например, НАД, не содержащий эндоксина IVD, НАД, не содержащий Na, или Na-содержащий НАД; NR-CL или NR-малат). Здесь можно лучше обеспечить высокое качество и стабильные поставки продукции благодаря эксклюзивной семиступенчатой технологии очистки Bonpure и цельноферментативному методу Bonzyme. Отказ Данная статья основана на ссылке в научном журнале. Соответствующая информация предоставляется только в целях обмена и обучения и не является медицинской консультацией. Если есть какое-либо нарушение, пожалуйста, свяжитесь с автором для удаления. Мнения, выраженные в данной статье, не отражают позицию BONTAC. Ни при каких обстоятельствах BONTAC не несет никакой ответственности за любые претензии, ущерб, убытки, расходы, затраты или обязательства любого рода (включая, помимо прочего, любые прямые или косвенные убытки в связи с упущенной выгодой, прерыванием деятельности или потерей информации), возникшие прямо или косвенно в результате вашего доверия к информации и материалам на этом веб-сайте.
1. Введение Согласно отчету Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) за 2020 год, во всем мире насчитывается около 2,3 миллиона случаев заболевания раком молочной железы. Рак молочной железы является одной из самых злокачественных опухолей у женщин со значительным уровнем заболеваемости. Несмотря на то, что в последние годы был достигнут большой прогресс в улучшении показателей излечения рака молочной железы на ранних стадиях, рак молочной железы на поздних стадиях все еще трудно поддается лечению. Как снизить риск рецидива и метастазирования рака молочной железы на ранней стадии, а также продлить выживаемость пациентов с распространенным раком молочной железы все еще остается проблемой в клиническом лечении рака молочной железы. Примечательно, что гинзенозид Rh2 (GRh2) оказывает заметное влияние на замедление прогрессирования рака молочной железы за счет усиления иммунного надзора за естественными киллерами (NK) клетками, своего рода цитотоксическими врожденными лимфоцитами, критически важными для иммунного ответа опухоли. 2. Репрессивная роль GRh2 в прогрессировании рака молочной железы GRh2 препятствует росту, пролиферации и метастазированию рака молочной железы. Проще говоря, масса тела и объем опухоли модельных мышей заметно уменьшаются после лечения GRh2 (10 мг/кг и 20 мг/кг). Кроме того, скорость пролиферации клеток рака молочной железы подавляется GRh2 дозозависимым образом (5, 10 и 20 мг/кг). При лечении GRh2 (20 мг/кг) потеря емкости легких, очевидно, уменьшается, а метастазы в легкие, образованные опухолевыми клетками MDA-MB-231, также значительно смягчаются, при этом отсутствуют видимые метастатические узелки в печени. 3. Усиленный киллерный эффект NK-клеток на клетки рака молочной железы после лечения GRh2 GRh2 оказывает замечательное влияние на замедление прогрессирования рака молочной железы за счет улучшения способности клеток NK92MI к уничтожению. В двух словах, уровни экспрессии мРНК киллерных медиаторов перфорина и ИФН-γ в системе совместного культивирования клеток NK92MI и клеток рака молочной железы явно повышаются после лечения GRh2. Поразительно, что уменьшение метастазирования рака молочной железы в легкие GRh2 практически противодействует истощению NK-клеток. По сравнению с контрольным носителем, количество CD107a, маркера дегрануляции NK-клеток, явно повышено в присутствии GRh2 (20 мг/кг), что подтверждает повышенную активность уничтожения NK-клеток при раке молочной железы. 4. Основной молекулярный механизм GRh2 по потенцированию активности NK-клеток против рака молочной железы Клетки рака молочной железы снижают распознавание NKG2D за счет протеолитического выделения MICA, опосредованного ERp5, чтобы избежать надзора NK-клеток. GRh2 препятствует образованию растворимой MICA (sMICA), подавляя экспрессию ERp5 для увеличения содержания киллерных медиаторов из NK-клеток, тем самым оказывая поразительное влияние на борьбу с раком молочной железы. 5. Заключение GRh2 потенцирует цитотоксическое действие NK-клеток и усиливает иммунную функцию надзора NK-клеток для борьбы с раком молочной железы, который может быть мощным кандидатом на лекарственные препараты для профилактики и лечения рака молочной железы. Ссылка [1] Сунг Х., Ферлей Дж., Сигел Р.Л. и др. Глобальная статистика рака 2020: оценки заболеваемости и смертности GLOBOCAN во всем мире для 36 видов рака в 185 странах. CA Cancer J Clin. 2021; 71(3):209-249. DOI:10.3322/CAAC.21660 [2] Yang C, Qian C, Zheng W, et al. Гинзенозид Rh2 усиливает иммунный надзор за естественными киллерами (NK) клетками путем ингибирования ERp5 при раке молочной железы. Фитомедицина. 2024;123:155180. DOI:10.1016/j.phymed.2023.155180 Преимущества продукта BONTAC гинзенозид Rh2 BONTAC является первым предприятием в мире, которое может обеспечить национальное массовое производство гинзенозидов (Rh2) методом ферментативного синтеза, с чистым сырьем, более высокой конверсией и более высоким содержанием (до 99%). В компании BONTAC доступны комплексные услуги по индивидуальному решению продукта. Благодаря уникальной технологии ферментативного синтеза Bonzyme здесь можно точно синтезировать изомеры как S-типа, так и R-типа, с более высокой активностью и точным нацеливанием. Наша продукция подвергается строгой независимой самопроверке, которая заслуживает доверия. Отказ Данная статья основана на ссылке в научном журнале. Соответствующая информация предназначена только для обмена и обучения и не является медицинской консультацией. Если есть какое-либо нарушение, пожалуйста, свяжитесь с автором для удаления. Мнения, выраженные в данной статье, не отражают позицию BONTAC.
1. Введение Рак желудка (РЖ) представляет собой глобальную проблему здравоохранения, который является пятым по распространенности раком и четвертой по значимости причиной смерти от рака во всем мире в 2020 году со значительным уровнем заболеваемости. Несмотря на эффективность улучшенной химиотерапии и хирургических вариантов, прогноз пациентов с ГК остается неудовлетворительным. Примечательно, что НАД+ является интригующей мишенью для терапии рака, используя его влияние на энергетический метаболизм и регуляцию путей. Это исследование разработано для изучения магической роли генов, связанных с метаболизмом NAD+ (NMRGs) в GC. 2. Создание прогностической модели риска для пациентов с ГК На основе уровней экспрессии генов, связанных с метаболизмом NAD+, в клеточных линиях GC создана прогностическая модель для пациентов с GC. Проще говоря, в общей сложности 13 нерегулируемых некодирующих РНК, относящихся к НМРНК, выделены с помощью регрессии ЛАССО для построения прогностической модели риска, при этом семь днРНК заметно повышены в регуляции и шесть явно понижены в тканях GC, что подтверждено полимеразной цепной реакцией в реальном времени. На этой основе выбираются шесть некодирующих РНК с минимальной вероятностью отклонения, соответствующей перворанговому значению Log(k), с последующим построением модельного AUC и расчетом оценки риска. Подробная формула расчета приведена ниже: оценка риска = AL139147,1 × (0,416) + AC107021,2 × (0,3119) + AC090825,1 × (0,1218) + AC005726,2 × (−0,0,0062) + AC012615,1 × (−0,0130) + AP001107,6 × (−0,0451). Установлено, что пациенты с показателями высокого риска имеют плохой прогноз. 3. Корреляция между иммунными факторами и показателями риска Уровни инфильтрации иммунных клеток, включая CD8 Т-клетки, CD4 наивные Т-клетки, CD4-активируемые памятью Т-клетки, В-клетки памяти и наивные В-клетки, заметно связаны с показателями риска. Кроме того, у пациентов с высоким риском наблюдаются активированные иммунные контрольные точки, а также высокие иммунные и стромальные баллы. 4. Роль НАД+ в метаболизме пациентов с ГК НАД+ не только способствует прогрессированию ГК, но и способствует инфильтрации иммунных клеток в опухоли. Модуляция НАД+ имеет важное значение для метаболизма пациентов с ГК. 5. Заключение НМРТ могут быть многообещающими биомаркерами для прогнозирования клинических исходов у пациентов с ГК и, в конечном итоге, способствовать их точному лечению. Ссылка Сунь С., Вэнь Х., Ли Ф., Бухари И., Жэнь Ф., Сюэ С., Чжэн. и Ми Ю. (2023). НАД+ ассоциированные гены как потенциальные биомаркеры для прогнозирования прогноза рака желудка. Онкологические исследования, 32 (2), 283–296. https://doi.org/10.32604/or.2023.044618 BONTAC NAD и NMN BONTAC обладает богатым опытом в области исследований и разработок и передовыми технологиями в области биосинтеза NAD и NMN. Используется цельноферментативный метод Bonzyme, который является экологически чистым, без вредных остатков растворителей. Чистота продуктов может достигать до 95%, чему способствует эксклюзивная семиступенчатая технология очистки Bonpure. BONTAC имеет собственные заводы и получила ряд международных сертификатов, где может быть обеспечено высокое качество и стабильные поставки продукции. BONTAC имеет более 170 отечественных и зарубежных патентов, являясь лидером в отрасли коферментов и натуральных продуктов. Отказ Данная статья основана на ссылке в научном журнале. Соответствующая информация предназначена только для обмена и обучения и не является медицинской консультацией. Если есть какое-либо нарушение, пожалуйста, свяжитесь с автором для удаления. Мнения, выраженные в данной статье, не отражают позицию BONTAC. Ни при каких обстоятельствах BONTAC не несет никакой ответственности за любые претензии, ущерб, убытки, расходы, затраты или обязательства любого рода (включая, помимо прочего, любые прямые или косвенные убытки в связи с упущенной выгодой, прерыванием деятельности или потерей информации), возникшие прямо или косвенно в результате вашего доверия к информации и материалам на этом веб-сайте.